分子生物工具书之：多肽纯化-DNA

▋ DNA 制备基础知识

人们如今对 DNA 的数据分析，不一定是通过多重 PCR、real-time PCR 和对比较丰富暴力事件的研究成果来透过的，因此除此以外制备 DNA 非常重要。除此以外的数据分析产物是获得除此以外的河段检测结果的必要条件。我们须要理解 DNA 制备控制系统的工作基本概念，然后针对紧接著应用选择最适合的化学更进一步。

DNA 制备常见的终究

● 硫化试样从而特赦 DNA● 将 DNA 分子与脂质、核糖体、糖类和 RNA 等其他分子剥离● 保持 DNA 分子的原始性

DNA 也许不同面临的终究也不同。例如巧克力等制品，其里含减缓性的阴离子，如果这些阴离子被已制备的 DNA 随身携带，则也许减缓河段的检测。从革兰氏阳性微生物里剥离 DNA 无需高效的硫化微生物厚厚的肽聚糖巨噬动物细胞。一定要确保安全你用到的 DNA 制备分析方法能够应对试样面临的难题。

温馨提示：血液和组织起来试样在用到前无需冷冻保存，以大大减少遗传微粒酶对 DNA 的破坏。在取出一小部分透过 DNA 制备先前无需将解冻后的血液完全混。

DNA 制备基本步骤

DNA 制备：硫化、常为结合和烘干

硫化：破坏巨噬细胞或组织起来-酶东南侧理-机械设备破坏-去垢剂东南侧理

硫化：使核糖体变性人或挽回活性-氢离子去垢剂、加热、还原剂、尿素和胺类类-遗传微粒（如遗传微粒 K）

硫化：使诱导遗传微粒酶-螯合剂（例如 EDTA）-遗传微粒（例如 遗传微粒 K）

常为结合与烘干：剥离 DNA-替换成其他遗传微粒（如 RNA）-替换成核糖体 •有机精油 •食盐析 •与固常为小分子常为结合 -硫酸上皮细胞 -阴氢离子反之亦然柱子 -导电颗粒

常为结合与烘干：从其他巨噬细胞微粒里剥离 DNA 的分析方法

■ 有机精油

当吡啶或吡啶: 组分与巨噬细胞硫化物混时，时会形成两常为：水常为和有机常为。极性 DNA 分子带入极性常为或「水常为」，而变性人的核糖体和其他巨噬细胞碎片则带入有机常为。

■ 食盐析

食盐可以让核糖体脱水，从而降很低其碱性，然后变性人，变性人后的核糖体减损溶解性从而溶；通过离心法替换成溶的核糖体和巨噬细胞碎片。特指的食盐包括包括氯化钠、甲酸钾或甲酸铵。

■ 与固常为小分子常为结合

绝大多数的 DNA 制备分析方法主要依据的基本概念是：通过针对性地与固常为小分子常为结合, 从而从粗硫化物里制备 DNA。这类固常为小分子包括硫酸小分子和阴氢离子反之亦然酯。不一定来说，用到固常为小分子制备 DNA 比其他分析方法用时更短、操作更便捷，因为不无需任何四氢呋喃，而且可以微型化和自动化从而实现高通量。

与 DNA 常为结合的固常为小分子子类

硫酸上皮细胞：DNA 时会在高浓度离液食盐（例如食盐酸胺类）存在的情形与硫酸常为结合，但是核糖体不时会。可以用到含乙醇的烘干液都为食盐，然后在很低氢离子强度的混物（例如 TE 或水）里下手 DNA。

阴氢离子反之亦然柱子：制备的主要基本概念是 DNA 里带负电荷的磷酸基团与反之亦然柱子上带正电荷的分子之间强子。在很低食盐条件下，DNA 与小分子常为结合，而核糖体和 RNA（不同所用的糖类）则被烘干都为。DNA 可以用高食盐糖类下手。

在颗粒微小透过的 DNA 导电剥离：许多商品化试剂盒的工作基本概念是用到导电颗粒从混物里猎捕 DNA。导电颗粒可以由硫酸等材料制成，DNA 的常为结合和下手不同食盐浓度或 pH。

DNA 、浓度和原始性

纯的、原始的 DNA 对于许多河段测定至关重要。特指评估 DNA 的特指分析方法是在 260nm 的波长东南侧（DNA 在该波长下有最大喉收峰）测定试样喉伴星。通过测定 280nm 波长东南侧的喉伴星，并且计算 260nm 与 280nm 东南侧的喉伴星之比，可以检测出制备更进一步里也许用到到的或残留在试样里的其他有机阴离子。萤光染料和 qPCR 是计算 DNA 浓度并确定纺织品原始性的替代分析方法，主要在本范本紧接著关于遗传微粒定量章节透过概要讨论。

视频也许：普洛麦格